反复冻融作用(为什么避免反复冻融)

1. 为什么避免反复冻融

Rho123是一种可以通透细胞膜的选择性染色活细胞线粒体的荧光染料，广泛用作检测线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential)的荧光探针。Rho123是阳离子荧光染料，在正常细胞中能够依赖线粒体跨膜电位进入线粒体基质。在细胞凋亡发生时，线粒体膜完整性破坏，线粒体膜通透性转运孔开放，引起线粒体跨膜电位(ΔΨm)的崩溃，Rh123重新释放出线粒体，通过荧光信号的强弱来检测线粒体膜电位的变化，可用于培养的细胞或从组织中提取出的线粒体的膜电位检测。

Rho123可以快速通过细胞膜，仅需几分钟就可以被具有活性的线粒体所俘获，并且对细胞没有任何毒性。Rho123的最大激发波长为507nm，最大发射波长为529nm。在荧光显微镜下观察，呈现黄绿色荧光。

储存条件：Rho123 -20℃避光保存，避免反复冻融。孵育缓冲液2-8℃保存。

有效期：一年。

2. 什么叫反复冻融

DNA降解的因素：萊垍頭條

外界物理因素:温度、湿度萊垍頭條

化学因素：pH值、水解反应、氧化反应萊垍頭條

生物因素：酶解及微生物侵染等作用。萊垍頭條

这些因素都直接与DNA的构型、分子组成有关垍頭條萊

DNA分子结构：頭條萊垍

DNA是由许多脱氧核苷酸残基按一定顺序彼此用3’，5’-磷酸二酯键相连构成的长链。萊垍頭條

[形成链的作用力——磷酸二脂键，易被水解]；頭條萊垍

大多数DNA含有两条这样的长链垍頭條萊

[两条链间以氢键相连接——氢键在强电解质环境，尤其在高酸度环境内易开键]頭條萊垍

也有的DNA为单链，如大肠杆菌噬菌体φX174、G4、M13等。有的DNA为环形，有的DNA为线形。萊垍頭條

选取的材料不新鲜或反复冻融，采集材料后未及时处理或未低温保存：陈旧血液或不新鲜的材料中，细胞凋亡导致DNA降解，或者低温保存的样品经反复冻融导致细胞破碎，内源性核酸酶降解DNA，因此应该选用新鲜的材料样品，不能及时处理则低温保存，运输过程中应该使用干冰：萊垍頭條

3. 冻融和融冻一样不

、【冻融侵蚀】(freeze-thaw erosion) 由于土壤及其母质孔隙中或岩石裂缝中的水分在冻结时体积膨胀，使裂隙随之加大、增多所导致整块土体或岩石发生碎裂，并顺坡向下方产生位移的现象。主要分布于冻土地带。世界上冻土总面积约3.5×107km2。俄罗斯和加拿大是冻土分布最广的国家。中国冻土主要分布在东北北部山区、西北高山区及青藏高原地区，面积约2.15×106km2，占国土总面积的22.4％。由于温度和地表物质的差异，冻融侵蚀引起冻土反复融化与冻结，从而导致土体或岩体的破坏、扰动、变形甚至移动。冻融是高寒冻土区塑造地形的主要营力。冻融作用表现形式主要为冰冻风化和融冻泥流。冰冻风化是冻土区最普遍的一种特殊物理风化作用。渗透到基岩裂隙中的水冻结时不仅可把岩石胀裂(冰劈作用)，而且由于膨胀所产生的压力还可以向外传递，把裂隙附近的坚硬岩层压碎形成石块和更细的物质，为其他外力作用创造了有利条件。耐冻融就是指抵耐冻融侵蚀萊垍頭條

4. 反复冻融法的优缺点

物理破碎法：指利用温度差、压力差或超声波等将细胞破碎开来。萊垍頭條

1．用一定功率的超声波处理细胞悬液，使细胞急剧震荡破裂(借助超声的震动力破碎细胞壁和细胞器）。條萊垍頭

机制：可能与强声波作用溶液时，气泡产生、长大和破碎的空化现象有关，空化现象引起的冲击波和剪刀力使细胞裂解。垍頭條萊

超声波破碎的效率取决于声频、声能、处理时间、细胞浓度和细胞类型等。（使用时注意降温，防止过热）。頭條萊垍

2. 高压破碎：细胞悬浮液从高压室的环状隙喷射到静止的撞击环上，被迫改变方向经出口管流出。此过程中细胞经历了高速造成的剪切的碰撞及高压到常压的变化，从而破碎释放内含物。萊垍頭條

这是一种温和的、彻底破碎细胞的较理想的方法。萊垍頭條

3. 反复冻融法：将细胞在-20度以下冰冻，室温融解，反复几次，由于细胞内冰粒形成和剩余细胞液的盐浓度增高引起溶胀，使细胞结构破碎萊垍頭條

5. 为什么不能反复冻融

原则上不能反复冻融的，因为PCR检测对象为核酸，核酸反复冻融会降解。如果病料不急于做实验，长期保存的话建议放在-20度；如果要做的话，建议放在4摄氏度。核酸样本在4度保存的话，一周扩增没什么问题，-20度保存一年应该没问题！垍頭條萊

6. 冻融的影响

冻融翻浆是青藏高原公路路基的常见现象，不严重时在路面上会出现松散、龟裂、车辙和裂缝、路基发软等现象，严重时则会影响行车安全，增大养护经费的支出，是公路养护中的难题之一。处理好翻浆，使公里处于完好状态，以保证车辆安全、快捷、舒适的运行．提高社会运输的效益有着十分重要的意义。萊垍頭條

7. 冻融作用危害

冻融是指土层由于温度降到零度以下和升至零度以上而产生冻结和融化的一种物理地质作用和现象。中国多属于季节性冻土类型。即冬季冻结，夏季消融，多年冻土类型少。

由于温度周期性的发生正负变化，冻土层中的地下冰和地下水不断发生相变和位移，使冻土层发生冻胀、融沉、流变等一系列应力变形，这一过程成为冻融。冰对岩石裂隙两壁便产生巨大的压力；而当气温回升时，冰便融化，加於两壁的压力骤减，两壁遂向中央推回。在反覆的冻结和融化过程中，岩石的裂隙就会扩大、增多，以致石块被分割出来，这种作用叫冻融作用（freeze and thaw action）。

岩石经此作用后可产生棱角状的碎石土地冻融是地质灾害的种类之一。它可产生一系列灾害作用，从而给生产建设和人民生活造成危害。垍頭條萊

冻融灾害在我国北方冬季气温低于零度的各省区均有发育。但以青藏高原、天山、阿尔泰山、祁连山等高海拔地区和东北北部高纬度地区最为严重。如东北北部冻土区有10%的路段存在冻融病害，个别线路病害路段达60—70%。青藏公路严重的冻融灾害给安全运输、道路养护、施工造成了极大的困难。萊垍頭條